堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性檢測試劑盒說明書 |
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堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性檢測試劑盒說明書 注意：正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存，變成藍綠色不能使用。 標準品：液體 1mL×1 支，2μmol/mL 酚標準液，4℃保存。 產品說明：AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。 AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。 在堿性環境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510 nm 吸光度增加速率，來計算 AKP 活性。試驗中所需的儀器和試劑： 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。 操作步驟：一、粗酶液提取： 稱取約 0.1g 組織，加提取液 1mL 充分研磨，4℃、10000rpm 離心 10min，取上清液待測。血液可直接用于測定，或者適當稀釋后用于測定。 二、測定步驟：1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 510 nm，蒸餾水調零。 2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30 min 以上。
www.yanjinbio.com 上海研謹生物科技有限公司 郵箱：yanjinbio@163.com 服務熱線：400-665-0203 本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！ 三、AKP/ALP 活性計算：1. 按蛋白濃度計算 活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。 AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T =0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr 2. 按樣本鮮重計算 活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。 AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W 3. 按液體體積計算 活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μmol 酚為一個酶活力單位。 AKP/ALP (U/mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T =0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) C 標準品：2μmol/mL；V 反總：反應體系總體積（mL），204μL=0.204mL； V 樣：加入反應體系中上清液體積（mL），0.004mL；T：反應時間（min），15 min；V 提取：加入提取液體積，1mL； W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。 注意事項：1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。 2、 試劑三變藍綠色后不能再使用。 3、 加入試劑三后必須立即混勻，否則顯色不*。 從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯系。
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